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《瑪利歐醫生64》將經典的NES病毒消除遊戲公式注入了強大的64位元效能與多人對戰的瘋狂樂趣。這一代不僅是簡單的畫面升級,更加入了完整的故事模式,玩家必須幫助瑪利歐醫生從貪婪的瓦里奧和他的手下手中奪回被偷走的超級維他命。遊戲新增多種模式,最重要的是激烈的四人競技對戰,使《瑪利歐醫生64》成為這款經典益智遊戲的最佳派對版本。
《瑪利歐醫生64》於2001年在任天堂64平台發行,由任天堂開發,旨在將這款經典益智系列帶給新一代玩家。雖然發售時間較晚,但因其功能豐富且充分利用主機四個手把插槽的多人混戰樂趣而受到好評。此遊戲後來在任天堂GameCube以日本限定的《任天堂益智合集》形式推出強化版,並加入了與GBA的連動功能。
核心玩法忠於原作:玩家將雙色維他命膠囊投放入瓶中,旋轉並排列以形成四個或以上相同顏色的直線,消除瓶中的病毒。《瑪利歐醫生64》的亮點在於豐富的新模式。主要的故事模式中,玩家將對戰來自《瓦里奧世界3》宇宙的多位對手,每個對手都有獨特的AI。遊戲的最大賣點是多人對戰模式,最多四人可同時進行經典對戰、2對2團隊戰或閃爍模式(目標是先消除特定閃爍病毒)。另外還有分數挑戰與馬拉松模式,讓《瑪利歐醫生64》成為內容最豐富、重玩價值最高的經典益智遊戲版本。